چکیده:ویروس هپاتیت G متعلق به خانواده فلاوی ویریده است و عفونت این ویروس را با بروز آسیب های کبدی ، عملکرد غیر عادی کبد و بد خیمی های کبدی مرتبط می دانند. مطالعات گذشته پیشنهاد دادند که یکی از علل بروز بیماری های کبدی با عامل نا مشخص یا کریپتوژنیک ممکن است ابتلا به عفونت ویروس هپاتیت G باشد. بنابراین در این مطالعه میزان شیوع عفونت ویروس هپاتیت G از طریق روش های مولکولی در گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز کریپتوژنیک در مقایسه با سیروز با علت مشخص مورد ارزیابی قرار گرفت. در این مطالعه مقطعی 283 بیمار گیرنده پیوند کبد به 2 گروه مبتلایان به سیروز کریپتوژنیک (122 نفر) و مبتلایان به سیروز با علت مشخص (161 نفر) مورد ارزیابی قرار گرفتند . ابتدا از نمونه های بافت کبد برش های مورد نظر تهیه و پس از استخراج ژنوم ویروس هپاتیت G و سنتز cDNA از آن با استفاده از روش Nested-RT-PCR راه اندازی شده امکان وجود عفونت با ژنوم ویروس هپاتیت G در نمونه های بافت مورد نظر مورد ارزیابی قرار گرفت. همچنین میزان نقش فاکتورهای خطر ساز بالینی و آزمایشگاهی در افزایش بروز عفونت ویروس هپاتیت G، با نسخه 15نرم افزار SPSS مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت. نتایج حاصل از این تحقیق نشان داد که از میان کل بیماران مورد مطالعه ( 283 نمونه) 22 نفر یا 8/7 درصد از این بیماران از نظر وجود ژنوم ویروس هپاتیت G مثبت بودند. در میان مبتلایان به سیروز کریپتوژنیک (9 نفر از 122 نفر، 4/7 درصد) مبتلا به عفونت این ویروس بودند. همچنین از میان مبتلایان به سیروز با علت مشخص (13 نفر از 161 نفر، 1/8 درصد) مبتلا به عفونت ویروس هپاتیت G بودند. از میان فاکتورهای خطرساز تنها میان دامنه سنی گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت مشخص ارتباط معنی دار مشاهده گردید. از طرف دیگر یک نفر از مبتلایان به سیروز با علت مشخص و همچنین تنها یک نفر از مبتلایان به سیروز کریپتوژنیک بطور همزمان مبتلا به عفونت سیتو مگالو ویروس بودند. از نتایج حاصل از این مطالعه چنین برداشت می شود که میزان شیوع عفونت ویروس هپاتیت G در گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز کریپتوژنیک و هم مبتلایان به سیروز با علت مشخص بالا می باشد. بنابراین تعیین میزان شیوع عفونت این ویروس در زمان قبل از پیوند در هر دو گروه مبتلایان به سیروز می تواند در مدیریت بالینی عوارض کبدی ایجاد شده بوسیله این ویروس در زمان های پس از دریافت پیوند کبد مؤثر باشد.
فهرست مطالب:چکیده
فصل اول: کلیات 1)مقدمه
1-1)هپاتیت ویروسی
2-1)ویروس هپاتیت G
1-2-1)تاریخچه
1-2-2) ساختمان ویروس
1-2-4) راه‌های انتقال عفونت
1-2-5) علایم بالینی
1-2-6) تشخیص آزمایشگاهی
1-3) تاریخچه پیوند کبد
1-3-1) معرفی پیوند کبد
1-3-2) فیزیولوژی و عملکرد کبد
1-3-3) انواع بیماریهای نیازمند پیوند کبد
1-3-3-1) نقص کبدی مزمن
1-3-3-2) نقص کبدی حاد
1-3-3-3) سیروز کبد
1-3-3-4) سیروزصفراوی اولیه
1-3-3-5) کلانژیت اسکلروزان اولیه
1-3-3-6) هپاتیت اتوایمیون
1-3-3-7) سیروز الکلی
1-3-3-8) کارسینوم سلول کبدی
1-3-4) زمان انجام پیوند
1-3-5) انواع عفونت در بیماران دریافت کننده پیوند کبد
1-4) مروری بر مطالعات انجام شده در زمینه عفونت ویروس هپاتیت G با سیروز کریپتوژنیک
1-5) اهداف تحقیق
هدف کلی
1-6) فرضیه ها ی تحقیق
فصل دوم: مواد و روش کار 2-1) جمعیت مورد مطالعه
2-2) لوازم مصرفی
2-3) لوازم غیر مصرفی
2-4) آزمایش های انجام شده در این تحقیق
2-5) روش های ملکولی (Molecular Methods)
2-5-1) واکنش زنجیره ای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction, PCR)
2-6) روش HGV-RT-Nested-PCR
2-6-1) استخراج HGV-RNA از نمونه های بافتی با روش RNX-PLUS
2-6-2) طراحی پرایمرژنوم ویروس هپاتیت G
2-6-3) سنتز CDNA
2-7) آزمایش مرحله اول HGV-RT-PCR
2-7-1) تهیه مخلوط واکنش مرحله اول HGV-RT-PCR
2-8) آزمایش مرحله دوم HGV-RT-PCR
2-8-1) تهیه مخلوط مرحله دوم واکنش HGV-RT-PCR
2-9) الکتروفورز و رنگ آمیزی محصولات PCR
2-10) طرز تهیه بافرها و محلول های مورد نیاز برای الکتروفورز ژل آگاروز
2-10-1) طرز تهیه بافر TAE
2-10-2) طرز تهیه ژل آگارز
2-11) مشاهده محصولات PCR
2-12) آنالیز آماری
فصل سوم: نتایج 3-1) تهیه پرسشنامه
3-2) معرفی گیرندگان پیوند کبد
3-2-1) بررسی وضعیت بیماریهای زمینه ای در گیرندگان پیوند کبد
3-2-2) بررسی وضعیت سن گیرندگان پیوند
3-2-3) بررسی وضعیت نهایی گیرندگان پیوند بعد از دریافت پیوند کبد
3-2-4) بررسی وضعیت گروه خونی گیرندگان پیوند
3-2-5) معرفی گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت مشخص (Determined Cirrhosis)
3-2-6) معرفی گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت نامشخص (Cryptogenic Cirrhosis)
3-2-7) تعیین فراوانی ژنوم ویروس هپاتیت G در بافت گیرندگان پیوند کبد
3-2-8) تعیین فراوانی ژنوم HBV در بافت گیرندگان پیوند کبد
3-2-9) تعیین فراوانی HBsAg در بافت گیرندگان پیوند کبد
3-2-10) تعیین فراوانی عفونت سیتو مگالو ویروس (CMV) در بافت گیرندگان پیوند کبد
3-2-11) بررسی عفونت همزمان ویروس هپاتیت G و سیتو مگالو ویروس در گیرندگان پیوند کبد
3-2-12) تعیین میزان آنزیم کبدی ( AST) در گیرندگان پیوند کبد
3-3) بررسی ارتباط عفونت ملکولی ویروس هپاتیت G با فاکتورهای خطرساز در کل گیرندگان پیوند کبد
3-3-1) بررسی ارتباط عفونت ملکولی ویروس هپاتیت G با فاکتورهای خطرساز در گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت مشخص (Determined Cirrhosis)
3-3-2) بررسی ارتباط عفونت ملکولی ویروس هپاتیت G با فاکتورهای خطرساز در گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت نامشخص (سیروز کریپتوژنیک)
3-3-3) بررسی ارتباط عفونت مخفی ویروس هپاتیت G در گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت مشخص در مقایسه با سیروز با علت نامشخص (سیروز کریپتوژنیک)
3-3-4) بررسی ارتباط میزان آنزیم های کبدی در گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت مشخص در مقایسه با سیروز با علت نامشخص (سیروز کریپتوژنیک)
3-3-5) بررسی ارتباط میزان شیوع عفونت CMV در گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت مشخص در مقایسه با سیروز با علت نامشخص (سیروز کریپتوژنیک)
فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری 4-1) بحث
4-2) بررسی عفونت همزمان ویروس هپاتیت G با سایر ویروس ها در گیرندگان پیوند کبد
4-3)بررسی وضعیت عفونت ویروس هپاتیت G در مبتلایان به سیروز کریپتوژنیک
4-4) نتیجه گیری
4-5) پیشنهادات
منابع
چکیده فارسی
چکیده انگلیسی
فهرست جداولجدول1- 1: پارامترهای سرمی مفید برای ارزیابی بیوشیمیایی نکروز و فعالیت سلول های کبد
جدول 2-1: توالی آغازگرهای بیرونی و درونی برای تشخیص ویروس هپاتیت G (GBV-C)
جدول2-2: پروتکل سنتز cDNA
جدول2-3:برنامه زمانی دستگاه ترموسایکلر برای سنتز cDNA
جدول2-4: پروتکل مرحله اول
جدول2-5: برنامه زمانی دستگاه ترموسایکلر مرحله اول HGV-RT-PCR
جدول2-6:پروتکل مرحله دوم HGV-RT-PC
جدول2-7: برنامه زمانی دستگاه ترموسایکلر مرحله دوم HGV-RT-PCR
جدول 3-1 : پرسشنامه طرح بررسی میزان شیوع عفونت مخفی ویروس هپاتیت G در گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز کریپتوژنیک
جدول3-2 : فراوانی گروه سنی گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت مشخص
جدول3-3: فراوانی گروه خونی گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت مشخص
جدول3-4: فراوانی گروه سنی گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت نا مشخص
جدول3-5: فراوانی گروه خونی گیرندگان پیوند کبد مبتلا به سیروز با علت نامشخص
فهرست شکل هاشکل 1-1 : طبقه بندی عوامل ویروسی ایجاد کننده هپاتیت
شکل 1-2 : ساختمان شماتیک ویروس هپاتیت G
شکل 1-3 : ساختمان ژنوم ویروس هپاتیت G
شکل 1-4 : نمای تغییرات سرولوژیک و ژنومی ویروس در خون مبتلایان به عفونت ژنوم ویروس هپاتیتG پایدار
شکل 1-5 : الگوی استفاده و تفسیر تست‌های آزمایشگاهی برای تشخیص عفونت ژنوم ویروس هپاتیتG
شکل 3-1 : الکتروفورز محصولات PCR و مشاهده HGV-DNA روی ژل آگاروز
-
راهنمای استفاده:
مناسب جهت استفاده دانش آموزان و دانشجویان رشته زیست شناسی
-
محتوای فایل دانلودی:
در قالب فایل word و قابل ویرایش